| Código |
15035
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| Ano |
1
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| Semestre |
S2
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| Créditos ECTS |
5
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| Carga Horária |
TP(40H)
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| Área Científica |
Biomedicina/Medicina/Bioquímica
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Tipo de ensino |
Presencial
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Objectivos de Aprendizagem |
No final do curso avançado "Do gene à proteína o estudante deverá ser capaz de:
a) Identificar os diferentes pontos de controlo da expressão génica e caracterizar os mecanismos moleculares envolvidos e sua regulação;
b) Descrever os princípios básicos subjacentes a técnicas de análise da expressão génica por PCR em tempo real e Western blot e compreender a sua utilização em diferentes contextos experimentais;
c) Executar os procedimentos laboratoriais das técnicas de PCR em tempo real e Western blot;
d) Analisar e interpretar resultados que resultam de experiências de análise da expressão génica;
e) Elaborar um plano experimental associado a uma das técnicas de análise da expressão génica;
f) Desenvolver a capacidade crítica e de análise de resultados científicos, e a interação com os colegas/professores de forma colaborativa
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Conteúdos programáticos |
Os conteúdos abaixo serão aplicados na realização de um mini-projeto prático que visa usar uma linha celular de espermatogónias (GC-spg1) para avaliar o efeito do silenciamento do recetor de estrogénios na expressão de um gene associado à proliferação celular, o c-kit.
1. Regulação da expressão génica: promotores, enhancers/silencers, insulators, mediadores, co-reguladores, mecanismos de splicing alternativo, RNA de interferência, miRNAs, lncRNAs, remodelação da cromatina, e metilação de ilhas CpG.
2. Ferramentas avançadas na edição da expressão génica: siRNAs, shRNAs, e CRISPR
3. Preparação de amostras para extração de ácidos nucleicos e proteína total.
4. PCR em tempo real: fundamentos, métodos de deteção, desenho de primers, análise da especificidade e eficiência dos primers, normalização, quantificação absoluta e relativa, análise de resultados.
5. Western blot: fundamentos, métodos de deteção, seleção de anticorpos, normalização, quantificação relativa, e análise de resultados.
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Metodologias de Ensino e Critérios de Avaliação |
As metodologias de ensino estão centradas no aluno e visam incutir uma aprendizagem ativa através da autoaprendizagem orientada, e pela discussão/interação com os colegas durante as aulas teórico-práticas (TP) e laboratoriais (PL). A aprendizagem é desenvolvida em seminários temáticos, complementados e discutidos durante as aulas TP e PL. São fornecidos os recursos apropriados para a aquisição dos objetivos deste curso avançado. A avaliação vai permitir avaliar corretamente tanto os conhecimentos como as competências técnicas adquiridas nas diversas atividades. Os objetivos a) e b) são avaliados através de um teste teórico. O objetivo c) é avaliado através da observação da execução das técnicas laboratoriais. O objetivo d) é avaliado no teste teórico e através da apresentação e discussão de artigos. O objetivo e) é avaliado através do delineamento de uma experiência prática. O objetivo f) é avaliado ao longo das atividades realizadas pela interação com os colegas.
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Bibliografia principal |
Livro:
- Molecular Cell Biology, Lodish et al., 9th edition, New York : Macmillan Learning, 2021.
Artigos:
- DOI: 10.3390/ijms17030291
- DOI: 10.1093/nar/29.9.e45
- DOI: 10.1016/j.ab.2020.113608
- DOI: 10.1002/bmb.21516
- DOI: 10.1007/s10529-006-9127-2
- DOI: 10.3390/cells9071675
- DOI: 10.1016/j.bdq.2015.01.005
- DOI: 10.1186/1471-2199-11-74
- DOI: 10.2144/btn-2019-0065
- DOI: 10.2144/05391RV01
- DOI: 10.1007/s13353-013-0173-x
- DOI: 10.1038/nprot.2006.83
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| Língua |
Português
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