Do Gene à Proteína: Uma Abordagem Prática

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Cláudio Jorge Maia Baptista
Código:
15889
Ano:
1
Semestre:
S2
Créditos ECTS:
5
Carga Horária:
PL(40H)/S(5H)/TP(5H)
Área Científica:
Ciências da Saúde
Objectivos de Aprendizagem:
O curso avançado "Do gene à proteína: uma abordagem prática" vai permitir aos alunos aplicarem no futuro estes conhecimentos na realização de tarefas relacionadas com o projeto de doutoramento. No final da UC o estudante deverá ser capaz de:
a) Identificar os diferentes pontos de controlo da expressão génica e caracterizar os mecanismos moleculares envolvidos e sua regulação;
b) Descrever os princípios básicos subjacentes a técnicas de análise da expressão génica por PCR em tempo real e Western blot e compreender a sua utilização em diferentes contextos experimentais;
c) Executar os procedimentos laboratoriais das técnicas de PCR em tempo real e Western blot;
d) Analisar e interpretar resultados que resultam de experiências de análise da expressão génica;
e) Elaborar um plano experimental associado a uma das técnicas de análise da expressão génica;
f) Desenvolver a capacidade crítica e de análise de resultados científicos, e a interação com os colegas e professores de forma colaborati
Conteúdos programáticos:
Os conteúdos abaixo serão aplicados na realização de um mini-projeto prático que visa avaliar o efeito do silenciamento de um gene numa linha celular na expressão de um gene associado à proliferação celular.
1. Regulação da expressão génica: promotores, enhancers/silencers, insulators, mediadores, co-reguladores, mecanismos de splicing alternativo, RNA de interferência, miRNAs, lncRNAs, remodelação da cromatina, e metilação de ilhas CpG.
2. Ferramentas avançadas na edição da expressão génica: siRNAs, shRNAs, e CRISPR
3. Preparação de amostras para extração de ácidos nucleicos e proteína total.
4. PCR em tempo real: fundamentos, métodos de deteção, desenho de primers, análise da especificidade e eficiência dos primers, normalização, quantificação absoluta e relativa, análise de resultados.
5. Western blot: fundamentos, métodos de deteção, seleção de anticorpos, normalização, quantificação relativa, e análise de resultados.
Bibliografia principal:
Livro:
- Molecular Cell Biology, Lodish et al., 9th edition, New York : Macmillan Learning, 2021.
Artigos:
- DOI: 10.3390/ijms17030291
- DOI: 10.1093/nar/29.9.e45
- DOI: 10.1016/j.ab.2020.113608
- DOI: 10.1002/bmb.21516
- DOI: 10.1007/s10529-006-9127-2
- DOI: 10.3390/cells9071675
- DOI: 10.1016/j.bdq.2015.01.005
- DOI: 10.1186/1471-2199-11-74
- DOI: 10.2144/btn-2019-0065
- DOI: 10.2144/05391RV01
- DOI: 10.1007/s13353-013-0173-x
- DOI: 10.1038/nprot.2006.83
Língua:
Português