Conteúdos programáticos |
Os conteúdos abaixo serão aplicados na realização de um mini-projeto prático que visa usar uma linha celular de espermatogónias (GC-spg1) para avaliar o efeito do silenciamento do recetor de estrogénios na expressão de um gene associado à proliferação celular, o c-kit. 1. Regulação da expressão génica: promotores, enhancers/silencers, insulators, mediadores, co-reguladores, mecanismos de splicing alternativo, RNA de interferência, miRNAs, lncRNAs, remodelação da cromatina, e metilação de ilhas CpG. 2. Ferramentas avançadas na edição da expressão génica: siRNAs, shRNAs, e CRISPR 3. Preparação de amostras para extração de ácidos nucleicos e proteína total. 4. PCR em tempo real: fundamentos, métodos de deteção, desenho de primers, análise da especificidade e eficiência dos primers, normalização, quantificação absoluta e relativa, análise de resultados. 5. Western blot: fundamentos, métodos de deteção, seleção de anticorpos, normalização, quantificação relativa, e análise de resultados.
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